酪氨酸 3-单氧合酶/色氨酸 5-单氧合酶激活蛋白,ETA 异构体

蛋白 14-3-3 是酪氨酸和色氨酸羟化酶的蛋白激酶依赖性激活剂 ( 191290 , 191060 ) 和蛋白激酶 C 的内源性抑制剂 ( 176960 )。14-3-3 蛋白以几种不同的形式存在:例如,β(YWHAB;601289)、γ(YWHAG;605356)、ε(YWHAE;605066)、zeta(YWHAZ;601288)、θ(YWHAQ;60909)西格玛 (SFN; 601290 ) 和 eta (YWHAH)。

▼ 克隆与表达
市村大岛等人。(1992)报道了编码人 14-3-3 蛋白的 mRNA 的 cDNA 克隆。cDNA 的 1,730 个核苷酸序列包含一个 191-bp 5-prime 非编码区、一个完整的 738-bp 编码区和一个 801-bp 3-prime 非编码区,带有 3 个典型的聚腺苷酸化信号。由 cDNA 编码的 eta 链是一个 246 个氨基酸的多肽,预测分子量为 28,196。人 14-3-3 蛋白质 eta 的预测氨基酸序列与先前报道的牛和大鼠蛋白质高度同源,只有 2 个氨基酸差异。Northern印迹分析表明eta链在源自各种人类肿瘤的培养细胞系中广泛表达。

▼ 基因结构
村武等人。(1996)确定人类 YWHAH 基因有 2 个外显子,由大约 8 kb 的内含子隔开。Muratake 等人使用 S1 核酸酶作图、引物延伸和 RACE PCR 。(1996)确定了转录起始位点。他们还在 5-prime 非编码区鉴定了几个调控元件序列,包括 CRE。村武等人。(1996)指出,CRE 结合元件的存在可能表明该基因参与了大脑对麻醉剂的反应。作者还发现位于外显子 1 非编码区的 7 bp 重复序列 (GCCTGCA) 发生变化,他们推测这些变化或该基因序列的其他变化可能与神经精神疾病有关。

▼ 生化特征
冷冻电子显微镜

帕克等人。(2019)使用冷冻电子显微镜来确定全长 BRAF ( 164757 ) 与 MEK1 ( 176872 ) 以及 eta (YWHAH) 和 zeta (YWHAZ) 的 14-3-3 二聚体复合物的自动抑制和活性状态结构;601288)。重建揭示了一个无活性的 BRAF-MEK1 复合物,它被限制在由 14-3-3 二聚体形成的摇篮中,它结合了 BRAF 激酶结构域侧翼的磷酸化 S365 和 S729 位点。BRAF 富含半胱氨酸的结构域占据了稳定该组装的中心位置,但相邻的 RAS 结合结构域排列不良且处于外围。14-3-3 摇篮通过隔离富含半胱氨酸的膜结构域和阻断 BRAF 激酶域的二聚化来维持自身抑制。在活性状态下,这些抑制性相互作用被释放,单个 14-3-3 二聚体重新排列以桥接 2 个 BRAF 的 C 端 pS729 结合位点,从而推动形成一个有活性的、背对背的 BRAF 二聚体。

▼ 映射
市村大岛等人。(1992)使用流式分选染色体的斑点杂交分析显示 eta 链位于 22 号染色体上。Tommerup 和 Leffers (1996)通过荧光原位杂交 (FISH) 将 YWHAH 基因定位到 22q12。村武等人。(1996)使用 FISH 将 YWHAH 基因映射到 22q12.1-q13.1。

▼ 基因功能
14-3-3 蛋白质家族通过与含磷酸丝氨酸的蛋白质结合来介导信号转导。Yaffe 等人使用面向磷酸丝氨酸的肽库来探测所有哺乳动物和酵母 14-3-3s 。(1997)鉴定了 2 种不同的结合基序,RSXpSXP 和 RXY/FXpSXP,它们存在于几乎所有已知的 14-3-3 结合蛋白中。YWHAZ ( 601288 )的晶体结构与多瘤中 T 中的磷酸丝氨酸基序复合,分辨率为 2.6 埃。作者表明,14-3-3 二聚体与包含串联重复磷酸丝氨酸基序的单个分子紧密结合,暗示双齿关联是与 Raf、BAD ( 603167 ) 和 Cbl等分子的信号传导机制。

Simsek-Duran 等。(2004)发现来自啮齿动物脑裂解物的 14-3-3 蛋白结合 Rim1 ( 606629 ) 蛋白的磷酸化残基 ser413 ,而它不结合非磷酸化 Rim1 突变体。用显性阴性 14-3-3-eta 突变蛋白进行突触前转染,显示与 Rim1 的结合减少,抑制了小鼠小脑长时程增强 (LTP)。作者得出结论,14-3-3 是参与突触前 LTP 的 ser413-Rim1 通路的必要下游成分;然而,他们注意到大脑 14-3-3 异构体不能被明确地鉴定为 eta。

标签: 蛋白

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