RNA 假尿苷酸合成酶结构域含有蛋白 4

RPUSD4 是一种假尿苷合酶,可结合线粒体 16S rRNA(MTRNR2; 561010 ),并负责在线粒体 tRNA(phe)(MTTF; 590070 ) 中形成假尿苷 39( Zaganelli et al., 2017 )。

▼ 克隆与表达

使用 RT-PCR,Zaganelli 等人(2017)克隆人类 RPUSD4。转染的 HeLa 和 143B 人骨肉瘤细胞的免疫荧光分析显示 RPUSD4 定位于线粒体 RNA 颗粒。亚细胞分离、碱性碳酸钠提取和蛋白酶 K 消化证实 RPUSD4 是线粒体基质蛋白。

▼ 基因功能

扎加内利等人(2017)无法获得纯合的 RPUSD4 敲除 143B 细胞,表明 RPUSD4 是必需基因。在通过短发夹 RNA 敲低 RPUSD4 表达的 143B 细胞中,Western 印迹分析显示呼吸复合物亚基减少,同时氧化磷酸化活性降低。在 RPUSD4 突变的复合杂合子 143B 细胞中观察到类似的呼吸表型,使 RPUSD4 表达降低 50%,并且这种表型可以通过 RPUSD4 的过表达来挽救。消耗 RPUSD4 还降低了全球线粒体翻译和 16S 线粒体 rRNA 和 39S 大线粒体核糖体亚基水平。RPUSD4 与 16S 线粒体 rRNA 共沉淀,并与 143B 细胞中的 39S 大线粒体核糖体亚基共沉淀。590065 ) 并在通用 tRNA 位点 39 和 50 处特异性结合假尿苷。 RPUSD4 的消耗显着减少了线粒体 tRNA(phe) 中的假尿苷 39,但在线粒体 tRNA(gly)(MTTG; 590035 ) 中没有。线粒体 tRNA(met) 中的假尿苷不受 RPUSD4 耗竭的影响。RPUSD4 耗竭对线粒体tRNA(phe) 稳态水平或氨酰化没有影响。

Antonicka 等人使用亲和纯化-质谱法和人类 143B 细胞的邻近生物素化测定(2017)发现 RNA 结合蛋白 FASTKD2( 612322 ) 与 RNA 颗粒蛋白和假尿苷合酶相互作用,包括 TRUB2( 610727 )、RPUSD3( 617759 )) 和 RPUSD4。通过短干扰 RNA 删除单个酶会在线粒体蛋白质合成和氧化复合物组装中产生特定缺陷,而不会影响线粒体 mRNA 水平。对特定分子靶点的研究表明,RPUSD4 在 16S rRNA 中残基的假尿苷化中起作用,这对于 16S rRNA 稳定性和组装成线粒体核糖体至关重要。TRUB2 和 RPUSD3 类似地参与线粒体 COX1(MTCO1; 516030 ) 和 COXIII( 516050 ) mRNA 的假尿苷化。

▼ 测绘

Gross(2017)基于 RPUSD4 序列(GenBank BC014131 ) 与基因组序列(GRCh38) 的比对,将 RPUSD4 基因对应到染色体 11q24.2。