PDZ 和 LIM 结构域蛋白 2; PDLIM2

  • MYSTIQUE
  • STAT 相互作用 LIM 蛋白;SLIM

HGNC 批准的基因符号:PDLIM2

细胞遗传学位置:8p21.3 基因组坐标(GRCh38):8:22,578,740-22,598,025(来自 NCBI)

▼ 克隆和表达

Torrado 等人(2004) 从眼睛总 RNA 中克隆了大鼠 Pdlim2。他们在视网膜、晶状体、视网膜色素上皮/脉络膜和胎儿眼睛 cDNA 文库中鉴定出了人类 PDLIM2 克隆。Northern印迹分析检测到大鼠角膜中高表达,而巩膜、肺以及组合小梁网、虹膜和睫状体中低表达。视网膜中未检测到表达。大鼠眼组织的原位杂交在角膜上皮细胞中检测到 Pdlim2,但在角膜基质或内皮或其他眼组织中未检测到 Pdlim2。

Loughran 等人通过在数据库中搜索与小鼠 Mystique 相似的序列,然后对乳腺癌细胞系 mRNA 进行 RT-PCR(2005) 克隆了 3 个人类 Mystique 变体,他们称之为 Mystique-1、-2 和 -3。推导的蛋白质含有 366、352 和 278 个氨基酸,计算分子量分别为 39.2、37.5 和 29.1 kD。Mystique-1 和-2 具有一个 N 端 PDZ 结构域和一个 C 端 LIM 结构域,间隔约 200 个氨基酸,但它们的 C 端不同。由于缺少外显子 9 并引入过早终止密码子,Mystique-3 仅具有 PDZ 结构域。RT-PCR 表明可能存在另外 2 个人类 Mystique 剪接变体。小鼠组织的 Northern 印迹分析显示 3 个 Mystique 剪接变体的组织特异性表达。Mystique-2 是大多数组织中的主要转录物,并且在肺中高度表达。3 种人类 cDNA 在 HeLa 细胞中的瞬时表达表明 Mystique-1 和 -2 主要位于细胞骨架,Mystique-3 主要位于细胞核,在细胞骨架附近的表达较弱。蛋白质印迹分析在所检查的 5 个人类细胞系中的 3 个中检测到表观分子质量为 37.5 kD 的内源 Mystique-2;未检测到其他 Mystique 同工型。Mystique-2 与乳腺癌细胞中的 α-肌节蛋白(参见 ACTN1;102575)和 ​​β-1-整合素(ITGB1;135630)共定位。蛋白质印迹分析在所检查的 5 个人类细胞系中的 3 个中检测到表观分子质量为 37.5 kD 的内源 Mystique-2;未检测到其他 Mystique 同工型。Mystique-2 与乳腺癌细胞中的 α-肌节蛋白(参见 ACTN1;102575)和 ​​β-1-整合素(ITGB1;135630)共定位。蛋白质印迹分析在所检查的 5 个人类细胞系中的 3 个中检测到表观分子质量为 37.5 kD 的内源 Mystique-2;未检测到其他 Mystique 同工型。Mystique-2 与乳腺癌细胞中的 α-肌节蛋白(参见 ACTN1;102575)和 ​​β-1-整合素(ITGB1;135630)共定位。

Tanaka 等人使用小鼠 Stat4(600558) N 端 133 个氨基酸作为诱饵,通过酵母 2-杂交筛选小鼠 Th1 克隆 cDNA 文库(2005) 分离出 Pdlim2,他们称之为 Slim。预测的 349 个氨基酸的小鼠 Slim 蛋白具有 N 端 PDZ 结构域和 C 端 LIM 结构域。小鼠组织的 Northern 印迹分析检测到 Slim 在肺中表达最高,在脾和胸腺中也有强表达。Slim 在原代小鼠 Cd4(186940) 阳性 T 细胞、Cd8(参见 186910) 阳性 T 细胞、B 细胞、巨噬细胞和树突状细胞中高度表达。Western blot 分析表明,在用 Il12 刺激之前和之后,Slim 存在于原代 Cd4 阳性 T 细胞的核提取物中,但不存在于细胞质提取物中(参见 161560)。

▼ 基因功能

Torrado 等人(2004) 发现 Pdlim2 与大鼠角膜和肺提取物中的 Actn1、Actn4(604638)、细丝蛋白 A(FLNA; 300017) 和肌球蛋白重多肽 9(MYH9; 160775) 共免疫沉淀。肌球蛋白 VI(MYO6; 600970) 与来自角膜而非肺提取物的 Pdlim2 共免疫沉淀。α-辅肌节蛋白是最丰富的免疫沉淀蛋白。使用纯化蛋白进行的 Pull-down 测定和凝胶覆盖测定证实了 Pdlim2 与 α-肌节蛋白和细丝蛋白的直接相互作用。转染 COS-7 细胞后,Pdlim2 和 α-辅肌节蛋白主要共定位于应力纤维,Pdlim2 和 Actn1 复合物优先位于基底面。

洛夫兰等人(2005) 发现人 Mystique-2 的表达是由 IGF1(147440) 和细胞粘附诱导的。Mystique-2 在乳腺癌细胞系中的过度表达可抑制贴壁依赖性生长并增强细胞对胶原蛋白(参见 120150)和纤连蛋白(FN1;135600)的粘附。PDZ 和 LIM 结构域内的点突变逆转了生长抑制,而单独的 PDZ 结构域突变则消除了细胞粘附的增强作用。用小干扰 RNA 敲低 Mystique-2 消除了 2 种乳腺癌细胞系中的粘附和迁移。洛夫兰等人(2005) 得出结论,Mystique 是一种 IGF1R(147370) 调节的衔接蛋白,位于肌节蛋白细胞骨架上,是上皮细胞迁移所必需的。

通过酵母 2-杂交、免疫共沉淀和蛋白质印迹分析,Tanaka 等人(2005) 表明小鼠 Slim 与酪氨酸磷酸化的 Stat4 相互作用。共转染分析显示,Slim 损害了 Stat 介导的基因表达,并且 Slim 具有泛素 E3 连接酶活性。免疫印迹分析还表明,Slim 促进了 Stat4 的降解和去磷酸化。Slim -/- Cd4 阳性小鼠 T 细胞显示出增强的 Ifng(147570) 产量,并且与野生型小鼠相比,Slim -/- 小鼠的肝脏对热灭活的单核细胞增生李斯特菌的炎症反应增强,并且 Stat1(600555) 和 Stat4 蛋白水平更高。田中等人(2005) 得出结论,SLIM 调节 STAT 蛋白表达水平和 STAT 激活程度,

▼ 基因结构

Loughran 等人(2005) 确定 PDLIM2 基因包含 12 个外显子,跨度约为 20 kb。翻译起始密码子位于外显子 2 中。

Loughran 等人通过基因组序列分析进行绘图(2005) 将 PDLIM2 基因定位到染色体 8p21.2。

▼ 动物模型

田中等人(2005) 发现 Slim -/- 小鼠健康且具有生育能力。与野生型小鼠相比,Slim -/- 小鼠表现出 Cd4 阳性 T 细胞产生的 Ifng 增强,肝脏对热灭活的单核细胞增生李斯特菌的炎症反应增强,并且 Stat 蛋白水平更高。