前 mRNA 加工因子 4； PRPF4

前体 mRNA 加工因子 4，酿酒酵母，同源物；PRP4
-HPRP4

HGNC 批准的基因符号：PRPF4

细胞遗传学位置：9q32 基因组坐标（GRCh38）：9:113,275,657-113,292,904（来自 NCBI）

▼ 描述

从核前 mRNA 中去除内含子发生在称为剪接体的复合物上，该复合物由 4 个小的核糖核蛋白（snRNP）颗粒和数量不定的瞬时相关剪接因子组成。PRPF4 是与 U4 和 U6 snRNP 相关的几种蛋白质之一（Gonzalez-Santos 等，2002）。

▼ 克隆和表达

Lauber 等人通过使用从 HeLa 细胞核提取物纯化的 PRPF4 肽序列设计的简并寡核苷酸筛选 HeLa 细胞 cDNA 文库，然后使用 5-prime RACE（1997）分离出编码PRPF4的全长cDNA。推导的 521 个氨基酸蛋白质的计算分子量约为 58.5 kD。通过Western blot分析，PRPF4的表观分子质量约为55 kD。PRPF4 包含 7 个 WD 重复序列，覆盖蛋白质的整个 C 端部分。这些重复预计会形成 7 倍 β 螺旋桨，就像在异源三聚体 G 蛋白的 β 亚基中发现的那样（参见 139380）。

霍洛维茨等人（1997）还克隆了PRPF4。他们确定 PRPF4 编码 522 个氨基酸的蛋白质，并且内源蛋白质的分子量约为 60 kD。

Wang等人使用酵母Prp4搜索序列数据库，然后进行PCR和cDNA文库筛选（1997）克隆了PRPF4。推导的蛋白质含有520个氨基酸。

陈等人（2014）评估了小鼠组织组中 Prpf4 的表达模式，并观察了所有组织中的表达，包括肺、肾、脑、脾、心脏和肝脏，以及神经视网膜和视网膜色素上皮细胞。

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FISH、Heng 等人绘制的图谱（1998）将 PRPF4 基因定位到染色体 9q31-q33。

▼ 基因功能

Lauber 等人（1997）和王等人（1997）证实了 U4/U6-U5 tri-snRNP 中存在 PRPF4，并发现 PRPF4 与 U4/U6 snRNP 关联更紧密。王等人（1997）确定大肠杆菌中产生的重组 HPRP3（607301）与 HeLa 细胞核提取物中的 HPRP4 直接相互作用。

冈萨雷斯-桑托斯等人（2002）确定 HPRP4 结合需要 HPRP3 的中心区域，而不是 N 或 C 末端。他们假设 HPRP3 可能会招募 HPRP4 进行 U4/U6 snRNP 组装。

▼ 分子遗传学

在一个患有色素性视网膜炎（RP70; 615922）的 3 代中国家庭和一名无关的中国散发性 RP 患者中，Chen 等人（2014）分别鉴定了 PRPF4 基因中错义突变（P315L; 607795.0001）和 18 bp 缺失（607795.0002）的杂合性。这些突变在每个家族中随疾病而分离，但在对照或 SNP 数据库中并未发现。功能分析表明，错义突变上调 PRPF4 以及其他 tri-snRNP 成分的表达，而缺失则下调 PRPF4 的启动子活性。

▼ 动物模型

陈等人（2014）在斑马鱼中过度表达prpf4 C944U（对应于人类PRPF4 P315L），并在受精后4天观察到全身畸形，包括畸形的大脑、短躯干、心源性水肿和弯曲的体轴。尽管眼睛大小正常，但光感受器结构以及内节和外节被严重破坏，免疫染色显示注射prpf4 C944U的斑马鱼视紫红质的反应性降低。此外，几个重要的视网膜转录本的表达水平降低，包括 opn1lw（300822）、gnat2（139340）、rs1（300839）、snrpg（603542）、prph2b（参见 179605）、gnb3（139130）和 rho（180380）。相比之下，突变斑马鱼中各种剪接因子的 mRNA 水平上调。在直系同源 prpf4 基因被沉默的吗啡斑马鱼中，

▼ 等位基因变异体（2 个选定示例）：.

0001 色素性视网膜炎 70
PRPF4、PRO315LEU
Chen 等人在患有视网膜色素变性（RP70; 615922）的第 3 代中国家庭的受影响成员中（2014）鉴定了 PRPF4 基因外显子 10 中 c.944C-T 转变的杂合性，导致在 PRPF4 7 个重复叶片中的第二个叶片中的高度保守残基处发生 pro315 到 leu（P315L）的取代。在未受影响的家庭成员、400 个不相关的对照或 SNP 数据库中均未发现该突变。对培养的患者成纤维细胞的定量 PCR 分析显示，与未受影响的家庭成员的成纤维细胞相比，PRPF4 表达上调 2.83 倍。野生型和突变型等位基因均上调，表明补偿反应，并且还观察到其他 tri-snRNP 成分的表达水平增加，包括 PRPF3（607301）、PRPF6（613979）、PRPF8（607300）、PRPF31（606419）、EFTUD2（603892）和 SART1（605941）。此外，非 snRNP 因子 SC35（SRSF2；600813）显着增加，在共焦显微镜下显示出弥散图案，而不是野生型中看到的明显斑点图案。斑马鱼中 P315L 突变体的过度表达引发了主要影响视网膜的系统性畸形，导致光感受器和内节和外节的破坏，以及视紫红质反应性的降低（180380）。

.0002 视网膜色素变性 70
PRPF4, 18-BP DEL, NT-114
在一名患有视网膜色素变性（RP70; 615922）的 53 岁中国男性中，Chen 等人（2014）鉴定了 PRPF4 基因 5-prime UTR 中 18-bp 缺失（c.-114_-97del）的杂合性。在他未受影响的儿子、400 个不相关的对照或 SNP 数据库中均未发现该突变。ARPE19 和 293T 细胞中缺失的荧光素酶检测显示，与野生型 PRPF4 相比，启动子活性分别降低了 66% 和 75%。与对照组相比，患者血细胞中 PRPF4 的表达降低了约 93%。