外核苷三磷酸二磷酸水解酶8

ENTPD8 是一种富含肝脏的质膜结合酶，可通过核苷三磷酸和二磷酸水解调节细胞外核苷酸浓度（Knowles 和 Li，2006 年）。

▼ 克隆与表达

通过肝脏 RNA 的 RT-PCR 和数据库分析，Knowles 和 Li（2006）克隆了人类 ENTPD8，他们称之为 ENTPDase-8。推导出的 495 个氨基酸的蛋白质包含细胞表面 ENTPDases 共有的多个特征，包括 2 个跨膜结构域，一个靠近 N 末端，另一个靠近 C 末端，5 个腺苷三磷酸双磷酸双磷酸酶（ENTPD1; 601752） 保守区域、4 个其他保守区域和 10 个保守半胱氨酸。它还具有 7 个 N-糖基化位点。人类 ENTPD8 与其鸡和小鼠的直系同源物分别具有 52% 和 67% 的氨基酸同一性。转染的 HEK293 细胞的蛋白质印迹分析表明，ENTPD8 在糖基化时的分子量约为 85 kD，在去糖基化时约为 50 kD。PCR 显示人类肝脏表达了一个 1.5-kb 的转录本，该转录本编码功能性 ENTPD8 和一个 1.7-kb 的转录本，其中包含 2 个不编码功能性 ENTPD8 的内含子。

福斯特等人（2007）基于与小鼠直系同源物的序列同源性克隆大鼠和人类 ENTPD8。除了Knowles 和 Li（2006）报道的特征外，他们还确定了人类 ENTPD8 中的几个磷酸化位点。免疫印迹分析检测到 Entpd8 在大鼠肝脏、肾脏和空肠中的表达，在肝脏的小管膜囊泡中表达最高。

▼ 基因结构

福斯特等人（2007）确定 ENTPD8 基因包含 9 个外显子，跨度约为 3.6 kb。

▼ 测绘

通过基因组序列分析，Fausther 等人（2007）将 ENTPD8 基因对应到染色体 9q34。他们将大鼠直系同源物对应到染色体 3p13。

▼ 基因功能

Knowles 和 Li（2006）发现人类 ENTPD8 在二价阳离子存在下水解二磷酸核苷和三磷酸核苷，并以跨膜结构域依赖性方式被叠氮化物、苯甲醇和去污剂抑制。ENTPD8 仅胞外结构域的表达表明跨膜结构域对于调节酶活性很重要。

Fausther 等人使用外核苷酸酶活性测定（2007）表明 Entpd8 负责大鼠肝脏中的主要核苷酸酶活性。大鼠肝脏的胆小管对二磷酸核苷的水解比三磷酸核苷的水解弱，这与 Entpd8 的水解偏好一致。用编码大鼠或人 ENTPD8 的质粒转染 COS-7 和 HEK293 细胞导致细胞表面的核苷酸水解。ENTPD8 比二磷酸核苷更喜欢三磷酸核苷，并且需要二价阳离子进行催化。

通过分析转染的 COS-7 细胞的细胞提取物，Munkonda 等人（2007）表明，除了 MRS2179（一种 AMP 类似物）外，所有测试的 P2 受体（见600845）拮抗剂均抑制人和小鼠质膜结合的 ENTPDase，包括 ENTPD8。ENTPD8 的抑制作用比其他 ENTPDase 低。