BRCA2-和 CDKN1A-相互作用蛋白

Ono 等人在脑 cDNA 文库的酵母 2-杂交筛选中使用 p21 的 C 末端一半(CDKN1A;116899 )作为诱饵(2000)克隆了 BCCIP,他们称之为 TOK1。脑 cDNA 文库的 EST 数据库分析和 PCR 揭示了 2 个 TOK1 变体,TOK1-α 和 -β。推断的蛋白质分别包含 322 和 314 个氨基酸,并且前 259 个氨基酸是相同的。使用两种 TOK1 变体共有的探针进行的 Northern 印迹分析检测到主要的 1.5-kb 转录物和次要的 3-kb 转录物。特定探针检测到两种 TOK1 变体均为 1.5-kb 转录本。TOK1-α 在骨骼肌中高度表达,而在检查的其他组织中几乎没有表达。TOK1-β在骨骼肌和心脏中高表达,在胎盘和胰腺中表达中等,在脑、肾和肝中表达较弱。蛋白质印迹分析检测到 TOK1-α 和 TOK1-β 分别为 50-和 45-kD 蛋白质。在同步的 HeLa 细胞中,TOK1-α 的表达在 G2/M 期之后开始,在 S 期之前达到峰值。TOK1-β 在整个细胞周期中都有表达,但与 TOK1-α 一样,它的表达在 S 期之前增加。

使用 BRCA2( 600185 )的内部保守区域作为酵母 2-杂交筛选中的诱饵,然后进行数据库分析,Liu 等人(2001)克隆了 BCCIP-α 和 -β,它们分别对应于 TOK1-α 和 -β。两种 BCCIP 异构体都有一个 N 末端酸性结构域和一个进化上保守的内部结构域,然后是 C 末端可变结构域。内部结构域包含推定的钙结合结构域。蛋白质印迹分析在所有检查的组织中检测到两种 BCCIP 蛋白。几种人类细胞系的免疫组织化学分析显示内源性 BCCIP 的核表达。

▼ 基因功能

Ono 等人使用突变分析(2000)发现 TOK1-α 与 p21 的 C 端近端区域结合。然而,TOK1-β 不绑定 p21。TOK1-α通过与 p21 的相互作用在人胚胎肾细胞中与 p21 和活性形式的 CDK2( 116953 )形成三元复合物。TOK1-α 增强了 p21 对 CDK2 的组蛋白 H1(见142709)激酶活性的抑制活性。

通过对转染的人胚胎肾细胞进行免疫共沉淀分析,Liu 等人(2001)证实 BCCIP-α 与内源性 BRCA2 相互作用。BCCIP-β 蛋白的表达在所检查的各种肿瘤细胞系中相对一致。相比之下,BCCIP-α蛋白在一些脑、乳腺和子宫内膜肿瘤细胞系中的表达降低,在一些子宫内膜肿瘤细胞系中增加,在肺癌细胞系中表达相对一致。BCCIP-α 表达抑制了一些乳腺癌和脑肿瘤细胞的生长,但对其他类型的癌细胞没有影响。

卢等人(2007)指出 BCCIP 调节 BRCA2 和 RAD51( 179617 ) 核焦点形成、DNA 双链断裂诱导的同源重组和细胞周期进程。他们将全长和截短的 BCCIP 片段转染到人纤维肉瘤细胞系中,发现与 BRCA2 或 p21 相互作用的 BCCIP 片段同样抑制同源重组。人类细胞中 BCCIP 的瞬时下调不影响转染 DNA 的非特异性整合,但它显着抑制了同源定向基因靶向。具有 BCCIP 组成性下调的细胞显示出自发单链 DNA 和双链断裂水平增加。卢等人(2007)得出结论,BCCIP 的多个结构域参与同源重组,并且 BCCIP 在解决自发 DNA 损伤中起关键作用。

使用匹配的正常/肿瘤 cDNA 阵列,Meng 等人(2003)发现肾肿瘤中 BCCIP-α 和 -β 的表达降低。

▼ 基因结构

孟等人(2003)确定 BCCIP 基因包含 9 个外显子,跨度约为 30 kb。BCCIP 基因的 5 素末端与相反链上的 UROS 基因( 606938 ) 以头对头的方式邻接。BCCIP 和 UROS 共享一个功能性基因间双向启动子,该启动子包含各种转录因子的结合位点。BCCIP 的最后 3 个外显子与相反链上 DHX32 基因( 607960 )的 7 个 3 素外显子重叠。

▼ 测绘

通过 FISH 和基因组序列分析,Liu 等人(2001)将 BCCIP 基因对应到染色体 10q25.3-q26.2。